凍干外泌體誘導膠原化和抗衰老:皮膚紫外線損傷是皮膚老化過程中紫外線損傷的累積,是內源性衰老與紫外線輻射相互作用的結果,具有組織解體、碎裂和膠原束分散等特征。基質金屬蛋白酶 (MMP) 可特異性降解幾乎所有細胞外基質 (ECM) 成分,并在皮膚光老化中發揮重要作用。光老化會逐漸損害人真皮成纖維細胞 (HDF) 的功能,后者會在真皮中產生膠原蛋白和基質金屬蛋白酶。誘導多能干細胞來源的外泌體(iPSCs-Exo) 可以增加光老化 HDFs 中 I 型膠原蛋白的表達水平,降低 SA-β-Gal、MMP-1/3 的表達水平,恢復衰老 HDFs 中 I 型膠原蛋白的表達。外泌體通過冷凍干燥技術,在低溫低壓下移除水分,從液態轉變為固態粉末,在長期儲存中保持其生物活性和結構完整性。
外泌體凍干時的關鍵要點:1. 要制備高純度、高濃度的外泌體溶液;2.選擇凍干保護劑時通常使用1%-5% (w/v) 的海藻糖溶解在PBS或無酶水中。優化配方需要通過實驗確定3. 預凍終點溫度必須低于樣品的共晶點或玻璃化轉變溫度,確保凍結。通常需要維持在-40°C以下數小時。4.外泌體品溫度與擱板溫度接近,且冷凝器捕獲的水分不再顯著增加時,表明一次干燥基本完成;5.外泌體的凍干后的制品的殘留水分是關鍵指標,一般需要控制在1%-3%之間。水分過高會影響穩定性,過低可能導致過度干燥而失活;6. 密封后的凍干粉應在-20°C或-80°C的干燥、避光環境中長期保存。
具有成熟的外泌體凍干工藝技術,可提供上下游的外泌體凍干技術,包括提供外泌體凍干保護劑篩選,凍干工藝優化,凍干放大生產。